Un factor de suma importancia en la preservación de la calidad del semen es la temperatura la cual debe reducirse de forma gradual una vez que el semen fue diluido. La reducción de la temperatura debe hacerse en 2 ó 3 horas hasta que el semen alcance la temperatura ideal para su conservación, la cual es de 15 –20 ºC.

Kommisrud et al. (2002) señala que el espermatozoide necesita tener intacto el acrosoma para la penetración de las barreras alrededor del óvulo, el acrosoma es más susceptible al daño durante la conservación, siendo estos la estructura básica de la motilidad, esto concuerda con los experimentos ejecutados por Buhr (1990), estableciendo que el decrecimiento de la fluidez de la membrana durante la conservación es mayor para el plasma de las membranas de las cabezas que para las membranas del cuerpo de los espermatozoides.

Tabla 1. Influencia de la temperatura sobre la motilidad espermática
Temperatura	Mortalidad
	24h	48h	72h	Media
4 ºC	43.75c	28.33c	13.33c	28.47
10 ºC	52.08b	39.16b	22.91b	38.05
16 ºC	65.83a	62.50a	57.91a	62.08
E.E	1.06	1.35	1.85	-
C.V	10.32	12.62	14.95	-
Letras diferentes difieren para p<0.001 E.E: Error Estándar C.V: Coeficiente de Variación

El objetivo de este trabajo consiste en determinar cual es la temperatura que menos afecta la motilidad y al acrosoma de los espermatozoides en un nuevo diluyente para la conservación del semen porcino refrigerado.

Materiales y Métodos

El experimento se realizó en el laboratorio de tecnología del CIMA. Se colectó el eyaculado de 25 sementales con una edad promedio de 24 meses de las razas Large White, CC21, Landrace, L35 y YorkShire, los cuales se encontraban situados en boxers individuales con una alimentación controlada y estable a base de concentrados a razón de 2 Kg./animal.

Tabla 2. Influencia de la temperatura sobre el daño al acrosoma
Temperatura	Puro %	24h	48h	72h
4 ºC	9	21.36c	34.09c	42.58c
10 ºC	9	15.62b	23.15b	29.33b
16 ºC	9	11.32a	13.48a	16.08a
E.E	-	1.11	1.25	1.42
C.V	-	17.40	23.62	28.58
Letras diferentes difieren para p<0.001 E.E: Error Estándar C.V: Coeficiente de Variación

La colecta del semen se llevó a cabo tres veces por semana mediante el método de mano enguantada, siempre en presencia de un maniquí, inmediatamente después de la colecta se procedió a la valoración de los eyaculados en el laboratorio, determinándose el volumen (ml) mediante una probeta graduada, la motilidad (%) por valoración al microscopio con platina calentable (37 ºC) en un aumento de 10 x y la concentración espermática (x 106/ml) mediante conteo en cámara de Newbauer. Se le realizó un espermiograma a cada eyaculado, para determinar el % de anomalías presentes en el mismo. Pasado 15 min. de obtenido el semen se tomó 2 gotas de cada eyaculado, depositándose en un porta objeto y este sobre una platina atemperada a 37 ºC observándose al microscopio por dos técnicos de forma independiente para determinar la motilidad y el daño del acrosoma, posteriormente cada dosis se conservó en 3 temperaturas diferentes ( 4 ºC, 10 ºC y 16 ºC ) en tres refrigeradores graduados durante 72 horas, para las 24, 48 y 72 horas post- dilución se tomaron 2ml de cada muestra, depositándose en un tubo de ensayo, e incubándose a 37 ºC, a los 30 min. de incubación se tomaron 2 gotas de cada eyaculado, depositándose en un porta objeto y este sobre una platina atemperada a 37 ºC observándose al microscopio por dos técnicos de forma independiente para determinar la motilidad y el daño del acrosoma sin previo conocimiento de la identificación de las mismas. Dos veces al día se removían suavemente las muestras refrigeradas para evitar el aglutinamiento de los espermatozoides (Levis 1999).
Análisis estadísticoPara determinar la influencia que ejerce la temperatura sobre la motilidad del semen y el daño que produce en el acrosoma hasta las 72 horas de conservación del semen porcino fresco refrigerado, se realizó un análisis de varianza teniéndose en cuenta diferentes temperaturas de conservación. Los datos fueron procesados según paquete estadístico (SAS 1995). Resultados y discusión

Acorde con los datos, se encontró un efecto significativo de la temperatura de conservación sobre la motilidad y % de daños del acrosoma p<0.001 (tabla 1 y tabla 2). La afectación de la motilidad puede deberse a la severidad del efecto de shock térmico que es dependiente de la proporción o grado de frío, la temperatura intermedia y las fluctuaciones de temperatura, siendo en general más severo por debajo de los 12 ºC. Fraser et al. (2002) plantea que el semen porcino debe ser conservado entre 15-18 ºC y puede ser mantenido a esta temperatura por varios días hasta su uso en la IA.

En la (tabla 2) también existieron diferencias altamente significativas (p<0.001) para las diferentes temperaturas al referirnos al daño del acrosoma, siendo de un 33.58, 20.33 y 7.08 para 4, 10 y 16 ºC respectivamente, estos resultados coinciden por los reportados por Kommisrud et al. (2002) donde señalaron que la integridad acrosomal en todo el tiempo de almacenaje en uno de sus estudios tuvo una alta significación durante todo el experimento ( p<0.001 ), este mismo autor almacenó semen diluido en BTS a una temperatura entre 16-18 º C y a las 72 horas el daño del acrosoma fue de un 9 %. El acrosoma es una de las estructuras más susceptibles en el espermatozoide a sufrir daño, después de diluido el semen factores como el estrés térmico, el periodo de conservación y el efecto del diluyente (en dependencia de los reactivos que formen parte de él pueden representar factores altamente negativos para el acrosoma. Conclusiones

ResumenEste experimento se realizó en el laboratorio de Tecnología del CIMA, con el objetivo de determinar la temperatura que menos afecta la motilidad y al acrosoma de los espermatozoides, en un nuevo diluyente para la conservación del semen porcino refrigerado, para esto se colectó el eyaculado de 25 sementales con una edad promedio de 24 meses de las razas Large White, CC21, Landrace, L35 y YorkShire.

Para la dilución del semen se utilizó el medio D 16 (Glucosa 3.20 g, EDTA 0.35 g, Citrato de Sodio 0.46 g, Cloruro de Potasio 0.08 g, Bromuro de Potasio 0.08 g, Bicarbonato de Sodio 0.15, Estreptopenicilina 0.10 g en 100 ml de agua destilada) atemperado a 37 ºC. La concentración final post dilución de cada dosis fue fijada en 4 x 109 millones/ 100ml, envasándose cada muestra en frascos de 120ml de color ámbar, cada dosis se conservó a 3 temperaturas diferentes ( 4 ºC, 10 ºC y 16 ºC) durante 72 horas. Pasado 15 min. de obtenido el semen se tomaron dos gotas de cada eyaculado, depositándose en un porta objeto y este sobre una platina atemperada a 37º C y observándose al microscopio por dos técnicos de forma independiente para determinar la motilidad y el daño del acrosoma, siguiéndose este procedimiento a las 24, 48 y 72 horas de conservación. Respecto a la motilidad se pudo observar que existieron diferencias altamente significativas (p<0.001) para las diferentes temperaturas donde la motilidad decreció en un 56.7%, 47.1 y 12.1 para 4 ºC, 10 ºC y 16 ºC respectivamente, también existieron diferencias altamente significativas (p<0.001) para las diferentes temperaturas al referirnos al daño del acrosoma, siendo de un 33.58, 20.33 y 7.08 para 4, 10 y 16 ºC. Se concluye que el semen porcino refrigerado debe de ser conservado entre 15 y 20 ºC de temperatura. Para el procesamiento estadístico de los datos se utilizó un paquete estadístico (SAS).